Xét Nghiệm Elisa Là Gì

  -  

ELISA là 1 chuyên môn được sử dụng đa số vào miễn kháng học, ứng dụng thoáng rộng trong các ngành y học, thực phđộ ẩm, nông nghiệp & trồng trọt,… Trong y học, kỹ thuật ELISA được vận dụng trong các xét nghiệm HIV, các bệnh dịch viêm gan siêu vi hay những bệnh tật lây nhiễm cam kết sinc trùng,…

1.Ngulặng lý chuyên môn ELISA

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent assay) là 1 trong những cách thức sinh hoá sử dụng đa phần vào miễn kháng học tập nhằm phân phát hiện tại sự hiện diện của một phòng thể hoặc kháng nguim trong một mẫu mã.

Bạn đang xem: Xét nghiệm elisa là gì

*

Hình 1: Nguyên ổn lý ELISA

Nguim lý của chuyên môn ELISA là dựa vào tính đặc hiệu chống nguyên ổn - kháng thể và được triển khai bằng hồ hết bước cơ phiên bản sau: Kháng nguim - antigene (KN) hoặc Kháng thể - antitoàn thân (KT) đang biết được gắn thêm bên trên một giá bán thể rắn, kế tiếp mang đến mẫu mã gồm chứa chống thể - antitoàn thân (KT) hoặc phòng nguyên ổn (KN) bắt buộc tìm vào giếng. Bổ sung thêm kháng thể bao gồm gắn thêm với ezyme. Bước cuối cùng thêm cơ hóa học (substance), enzyme sẽ chuyển đổi cơ hóa học này với sinh sản biểu hiện color có thể xác định được sử dụng máy đo huỳnh quang quẻ.

2. Các cách thức ELISA

ELISA trực tiếp (direct ELISA):

Phương pháp này thường xuyên thực hiện vào ELISA định tính, không nhiều sử dụng trong định lượng. Phương pháp này còn có ưu thế là chỉ cần một đợt ủ cho nên vì vậy tiết kiệm ngân sách thời hạn cùng tối thiểu được vấn đề kiểm soát và điều hành những ĐK trong quá trình tiến hành (đổi khác ánh nắng mặt trời cùng buffer cho mỗi lần ủ, tính thời gian…). Tuy nhiên, yếu điểm của nó là nhuộm color nền (background staining) cao vày sự links không sệt hiệu của phòng thể cùng với bề mặt rắn với những protein cố định và thắt chặt trên bề mặt rắn. Việc lưu lại từng loại kháng thể thực hiện cho từng chống nguyên ổn cũng rất tốn kỉm, duy nhất là lúc nên chẩn đoán một trong những lượng bự các nhiều loại phòng ngulặng khác nhau.

ELISA con gián tiếp (indirect ELISA):

Ưu điểm của phương pháp này là độ nhạy cảm cao chỉ cần tạo nên một loại kháng phòng thể có enzyme để nhận biết cho các kháng nguim khác biệt. Tuy nhiên yếu điểm của chính nó là tăng số bước thực hiện vì vậy có tác dụng tăng vấn đề kiểm soát những điều kiện, quá trình tiến hành xét nghiệm với kéo dãn thời gian chẩn đoán thù.

ELISA sandwich:

Pmùi hương pháp này có tương đối nhiều ưu điểm thừa trội, thứ nhất là độ nhạy cao giảm được nhuộm màu nền và những bội phản ứng không đặc hiệu do sẽ loại bỏ được phần lớn các yếu tắc tạp, phản nghịch ứng được tiến hành thuận tiện hơn.

*

Hình 2: Các cách thức chuyên môn ELISA

ELISA cạnh tranh (competitive sầu ELISA)

ELISA tuyên chiến đối đầu là phương thức ELISA khôn cùng hiệu quả cho định lượng các nhân tố hiện diện trong mẫu mã cùng với lượng nhỏ tuổi. ELISA tuyên chiến đối đầu thực hiện một lượng kháng nguim cùng một số loại cùng với kháng ngulặng mà ta hy vọng định lượng vào mẫu (kháng nguyên cạnh tranh) mang đến bội phản ứng miễn dịch với 1 loại kháng thể quánh hiệu thắt chặt và cố định cùng bề mặt rắn, tiếp đến đo lượng phòng nguim tuyên chiến đối đầu và cạnh tranh này thông qua hoạt tính enzyme được liên kết với nó. Kháng nguyên đối đầu càng hiện diện các cho biết thêm loại chống nguim kia vào mẫu mã càng không nhiều và ngược lại.

3. Những vấn đề cần lưu ý khi thực hiện kỹ thuật ELISA

Do chuyên môn ELISA là chuyên môn miễn dịch cung cấp auto bắt buộc công dụng xét nghiệm có khả năng sẽ bị ảnh hưởng nhiều bởi các nhân tố như: con bạn, cách thức thao tác, Hóa chất, sản phẩm đối chiếu. Để cai quản unique xuất sắc những nghệ thuật xét nghiệm ELISA thưởng thức bắt buộc tiến hành thích hợp tiến trình của từng loại xét nghiệm.

3.1. Dụng cố kỉnh và hóa chất

- Ống nghiệm.

- Giá đựng ống thử.

- Micropipette gồm các thể tích không giống nhau trường đoản cú 1^l mang đến 1000^l.

- Đầu type nhựa đã nhập vào Micropipette.

- Giấy thnóng.

- Máy rửa giếng ELISA.

- Máy hiểu ELISA.

- Sở Hóa chất gồm có:

+ Các thanh nhựa đang thêm phòng nguyên/phòng thể + Dung dịch rửa.

+ Calibration + Chứng âm + Chứng dương.

+ Cộng vừa lòng.

+ Cơ chất.

+ Dung dịch trộn loãng máu thanh khô.

+ Chất ngưng làm phản ứng.

3.2. Mẫu căn bệnh phẩm

+ Sử dụng mẫu mã máu tĩnh mạch máu được cho vô vào ống thử không bẩn ko cất hóa học phòng đông hoặc tất cả chứa hóa học kháng đông (Heparin/EDTA) tùy theo thưởng thức từng nhiều loại xét nghiệm.

+ Mỗi mẫu huyết sẽ tiến hành nhằm vào những ống thử riêng lẻ tất cả dán mã Barcode cùng tên tuổi khá đầy đủ, có nắp vặn bí mật.

+ Các mẫu mã ngày tiết được cho vào vỏ hộp kín đi lại về chống xét nghiệm trong thời hạn sớm nhất có thể.

Xem thêm: Nghĩa Của Từ Come Across Nghĩa Là Gì, Nghĩa Của Từ Come Across Là Gì

+ thường thì những chủng loại huyết để gia công các xét nghiệm ELISA đang bình ổn vào 12h ngơi nghỉ ánh nắng mặt trời phòng từ bỏ 20 - 25 ºC, ánh sáng 2 - 8 ºC ổn định vào 24 - 48h.

+ Tại phòng xét nghiệm những chủng loại tiết sẽ tiến hành phân pân hận về Khu Vực triển khai từng xét nghiệm riêng biệt và mã hóa số chủng loại theo từng dịch vụ xét nghiệm để tránh việc lây lan chéo cánh hoặc lầm lẫn chủng loại bệnh dịch phẩm.

3.3. Quản lý chất lượng

Kỹ thuật ELISA là chuyên môn miễn kháng chào bán tự động hóa đến nên việc quản lý quality vào quy trình làm xét nghiệm đóng góp một vai trò vô cùng quan trọng. Cần thiết đề xuất giới thiệu các quy trình kiểm soát điều hành chất lượng ngặt nghèo trên từng bước thực hiện:

+ Trước xét nghiệm: Mẫu bệnh dịch phẩm đề xuất đạt tận hưởng ko được vỡ vạc hồng cầu, không truyền nhiễm trùng, mật độ mỡ bụng ngày tiết cao cũng ảnh hưởng mang lại công dụng xét nghiệm.

+ Trong xét nghiệm: Thực hiện Calibration và Control trong những lần thực hiện chủng loại theo đúng kinh nghiệm của từng cỗ kít xét nghiệm.

+ Sau xét nghiệm: Kết quả mẫu mã người mắc bệnh chỉ được đồng ý lúc mặt đường Calibration với Control vào cùng một lần thực hiện đạt hiệu quả xuất sắc. Kết quả sau khoản thời gian tiến hành so sánh xong xuôi đề xuất thực hiện những phần mềm ghi dấn kết quả thẳng, tránh ghi thủ công gây không đúng số tác dụng vì chưng nhầm lẫn khi vào sổ.

3.4. Quy trình kỹ thuật

Thực hiện tại theo đúng khuyên bảo trong phòng cung cấp.

Quy trình gồm các bước thiết yếu sau đây:

Cách 1: Cho chủng loại người mắc bệnh, chứng âm, triệu chứng dương vào giếng nhựa sẽ gắn thêm sẵn chống nguyên/kháng thể. Ủ ngơi nghỉ nhiệt độ chống hoặc 37 ºC, thời gian ủ theo hướng dẫn của phòng chế tạo.

Cách 2: Rửa những giếng bởi hỗn hợp đệm PBS - Tween 20, thấm giấy mang đến ráo nước.

Cách 3: Cho cùng hòa hợp vào mỗi giếng, ủ nghỉ ngơi ánh nắng mặt trời chống hoặc 37 ºC, thời hạn ủ theo phía dẫn của phòng cung ứng.

Cách 4: Rửa các giếng bởi dung dịch đệm PBS - Tween trăng tròn, thnóng giấy đến ráo nước.

Bước 5: Cho cơ hóa học vào từng giếng, đợi chờ cho màu lộ diện (15 - 30 phút).

Cách 6: Cho dung dịch dừng phản bội ứng.

Cách 7: Đọc tác dụng bằng máy gọi ELISA từ bỏ động

*

Hình 3: Phản ứng ELISA sandwich

Tóm lại trong mỗi bước của quy trình chuyên môn ELISA số đông có tác dụng ảnh hưởng mang đến tác dụng xét nghiệm nếu nhỏng người chuyên môn viên tiến hành ko có tác dụng hòa hợp quy trình sẽ phát hành. Các yếu tố nguy cơ tiềm ẩn giỏi gặp gỡ có thể dẫn đến không nên số hiệu quả là:

+ Hóa hóa học không nhằm ổn định sinh sống nhiệt độ chống trước lúc có tác dụng xét nghiệm.

+ Hút ít sai thể tích mẫu mã trộn loãng, không nên thể tích dung dịch test.

+ Thời gian ủ cùng ánh sáng không đúng: khiến âm tính hoặc dương tính giả.

+ Rửa không sạch: đề xuất thực hiện sản phẩm cọ tự động hóa để bảo đảm an toàn đủ thể tích nước rửa và chu kỳ rửa, không thấm khô ktuyệt mẫu sau khi rửa chấm dứt.

+ Không đọc kết quả ngay sau khi ngừng bội nghịch ứng.

3.5. Biện luận kết quả

- Ngưỡng dương tính có thể khác biệt đối với từng một số loại xét nghiệm. Biện luận kết quả dựa trên ngưỡng dương tính vày công ty cấp dưỡng giới thiệu.

- Các kỹ thuật miễn kháng phát hiện kháng thể cho kết quả loại gián tiếp, không tồn tại cực hiếm tuyệt vời và hoàn hảo nhất.

- Kết trái âm tính cũng ko sa thải hoàn toàn ko lây lan bệnh, hoàn toàn có thể bởi new bị lây truyền, hoặc bị lan truyền thừa thọ, hoặc lượng kháng nguyên/phòng thể vượt ít để hoàn toàn có thể vạc hiện tại được bởi phương pháp ELISA. Trong ngôi trường vừa lòng ngờ vực mắc dịch trên lâm sàng đề nghị làm cho lại xét nghiệm sau 1-2 tuần. Xét nghiệm vài ba lần nhằm theo dõi và quan sát dịch chuyển của kháng thể/ chống nguyên ổn có mức giá trị hơn là xét nghiệm một lần. Nếu đề nghị, đề xuất kiểm soát lại bởi những chuyên môn không giống.

- Kết quả dương tính cũng không xác minh hoàn toàn vị hoàn toàn có thể dương tính trả do bội nghịch ứng chéo thân những các loại ký sinch trùng hoặc nền tảng gốc rễ tạo căn bệnh.

Vì vậy, những phản ứng miễn dịch tra cứu chống nguyên/chống thể cấp thiết sửa chữa thay thế hoàn toàn xét nghiệm thẳng trong chẩn đoán thù nguim nhân dịch. Kết trái xét nghiệm, cho dù âm tuyệt dương, cũng rất cần được cẩn thận một giải pháp cảnh giác, kết hợp với các nhân tố dịch tễ hoặc đa số xét nghiệm bổ sung cập nhật không giống (sinch học tập phân tử, nuôi ghép tế bào…) với hầu như cung cấp phi lâm sàng không giống (XQ, rất âm…).

Xem thêm: By Way Of Là Gì ? Tự Học Tiếng Anh: By Way Of = Theo Đường

Với đội ngũ Chuyên Viên, chưng sĩ giàu kinh nghiệm, hệ thống đồ đạc tiến bộ cũng như các bước làm chủ chất lượng ngặt nghèo (theo tiêu chuẩn chỉnh ISO 15189:2012), chuyên môn ELISA được tiến hành trên Bệnh viện Đa khoa vnggroup.com.vn luôn luôn bảo vệ hiệu quả xét nghiệm sớm nhất có thể, đúng chuẩn độc nhất. Mọi vướng mắc xin liên hệ tổng đài 1900 565656 để được hỗ trợ tư vấn và giải đáp.